单纯疱疹Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡAb-IgM)检测

单纯疱疹Ⅱ型抗体IgM(HSVⅡAb-IgM)检测

    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔表面包被纯化的HSV抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在HSV—ⅡAb—IgM可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中HSV—ⅡAb-IgM含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。

    [标本准备]  静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．微孔板

    2．样品稀释液

    3．HRP-抗人IgM酶结合物

    4．阴性对照

    5．阳性对照

    6．洗涤剂

    7．TMB显色液

    8．终止液

    [仪器设备]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤)

    1．吸取10ul血清标本加入250,ul标本稀释液中，做1：26稀释。

    2．吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释)，加入微孔板内，设空白对照l孔。振荡，混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。

    3．弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。

    4．每孔再加入100iA酶联结合物，室温环境中孵育20min。

    5．弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。

    6．每孔加入100ul TMB显色液，室温环境中孵育10min。

    7．每孔加入100ul终止液，终止反应，充分混匀。

    8．用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。

    [注意事项]

    1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。

    2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

    3．试剂应保存于2—8℃冰箱，使用前应在室温环境中平衡30min。

    4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上扣干。

    5．血标本应分离出血清保存，2—8C可保存7d，冷冻保存可至6个月，避免反复冻融。

    6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。

    [正常参考值)  HSV—ⅡAb-IgM阴性

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