单纯疱疹Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡAb-IgG)检测

单纯疱疹Ⅱ型抗体IgG(HSVⅡAb-IgG)检测

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    [测定方法]  ELISA法

    [方法学原理]  在微孔表面包被纯化的HSV抗原。被稀释过的患者血清加入微孔中。如存在HSV-ⅡAb—IgG可与微孔上抗原相结合。然后洗去未结合物质，再加入酶联液，与抗原抗体复合物结合。洗去过量的酶联液。最后加入底物和色原(显色液)。在特定时间终止酶联液的催化反应。所产生的颜色强度与标本中HSV—ⅡAb-IgG含量呈正相关。通过酶标仪与校正和对照相比，读出结果。

    [标本准备] 静脉抽血2ml，不抗凝。

    [试剂]

    1．微孔板

    2．样品稀释液

    3．HRP-抗人IgG酶结合物

    4．阴性对照

    5．阳性对照

    6．洗涤剂

    7．TMB显色液

    8．终止液

    [仪器设备]  酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。

    [测定步骤]

    1．吸取5ul血清标本加入250ul标本稀释液中，做1：51稀释。

    2．吸取100ul稀释过的血清、阳性对照、阴性对照和校正液(不稀释)，加入微孔板内，设空白对照1孔。振荡混匀，去除孔内液体中气泡，室温环境中孵育20min。

    3．弃去孔内液体，用洗涤液洗5次。

    4．每孔再加入100ul酶联结合物，室温环境中孵育20rain。

    5．弃去孔中酶联液，用洗涤液洗5次。

    6．每孔加入100ul TMB显色液，室温环境中孵育10min。

    7．每孔加人100rd终止液，终止反应，充分混匀。

    8．用酶标仪(波长为450nm)读取吸光度。以待测样本吸光度大于校正液孔吸光度为阳性。

    [注意事项]

    1．整个检测过程应符合实验室质量手册和生物安全守则规定，严防交叉污染。

    2．所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。

    3．试剂应保存于2～8℃冰箱，使用前应在室温环境中平衡30rain。

    4．洗涤时各孔均应加满洗涤液，防止孔内有游离酶未洗净，每次洗板后均应在吸水纸上拍干。

    5．血标本应分离出血清保存，2～8℃可保存?d，冷冻保存可至6个月，避免反复冻融。

    6．试剂在储存或使用过程中，禁止过热、曝晒或强光。

    [正常参考值]  HSV—ⅡAb-IgG阴性

    [临床意义]  HSV先天性感染主要是通过胎盘引起宫内感染，诱发早产、死胎、胎儿畸形及脑、眼等多器官损害。HSV也可通过呼吸道或产道造成新生儿感染，可呈无症状隐性感染，也可引起不同形式或不同程度的临床表现，轻者仅为口腔、皮肤、眼部疱疹，重者则呈中枢神经系统感染甚至全身性播散性感染。

    HSVAb-IgM阳性提示为患者感染早期或原发性感染。但IgM抗体因在检测过程中易受各种因素的影响，出现假阴性结果，因此HSVAb—IgM阴性结果不能完全排除HSV感染。HSVAb—IgG阳性，说明曾经感染这种病原体，具有一定免疫力。连续监测IgG抗体水平，若IgG迅速升高到4倍以上的较高水平时，患者可能为HSV再次感染。

    在HSV的两个亚型中，HSV-I型主要通过呼吸道或与患者病损部位直接接触而传播，引起呼吸系统、皮肤黏膜病变，妊娠妇女感染该病毒可引起宫内感染；HSV-Ⅱ型主要通过接吻和性交传播，引起性器官病变和新生儿感染。

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