发布时间:2009-10-10 00:48:38
EB病毒抗体IgM(EBVAb-IgM)检测
EB病毒(epstein-barr virus,EBV)属疱疹病毒科,有学者提出此病毒为第1个人类肿瘤病毒的候选者。EBV直径为90~180nm,为20面体核衣壳,有162个衣壳体,含有1个蛋白核心和DNA分子,病毒基因组为线性双链DNA。原发性感染发生在幼儿时,多为隐性感染,此后终身带病毒;若原发感染发生在青春期后,则相当一部分为显性感染。EBV感染患者后可出现传染性单核细胞增多症、X—连锁淋巴增殖综合征,以及与EBV相关的恶性疾病如鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等。
[测定方法] ELISA法
[方法学原理] 将纯化的EB病毒抗原预包被于微孔板上,加入稀释过的患者血清于相应微孔板中,若存在EBVAb-IgM则可与微孔板上包被抗原相结合。洗去未结合部分后,再加入酶联结合物,与抗原抗体复合物结合,在显色剂作用下发生显色反应,颜色强度与样本中EBVAb-IgM含量呈正相关。
[标本准备] 静脉抽血2ml,不抗凝。
[试剂]
微孔板
样品稀释液
HRP-抗人IgM酶结合物
阴性对照
阳性对照
洗涤剂
TMB显色液
终止液
[仪器设备] 酶标仪或全自动酶联免疫检测仪。
[测定步骤]
1.将待检血清编号,用样品稀释液作1;100稀释。
2.根据用量取出相应孔数的微孔板条,其余部分密封后
3.加人已稀释的待检血清、阴性对照,阳性对照各lOOgI至反应孔内,阴性对照、阳性对照设复孔,设空白对照1孔(空白孔不加任何试剂),振荡混匀,
4.弃去孔中液体,用洗涤液洗涤5次,拍干。
5.每孔加入酶标记物lOOtA,混匀,
6.弃去孔中液体,用洗涤液洗涤5次,拍干。
7.向每孔加入底物A液和底物B液各2滴,置室温环境中10min,每孔再加终止液50gl终止反应。
8.以空白对照(只加蒸馏水
[正常参考值] EBVAb-IgM阴性
[注意事项]
1.使用前试剂盒应预先在室温环境中平衡30min。
2.试剂盒在2—
3.不同批次的试剂组分不能混用。
4.实验后试剂、血清标本均应视为有传染性物质。
5.用滴瓶滴加时,滴瓶应垂直,用力和速度应均匀;加样后,充分混匀。
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