热线电话:

厦门慧嘉生物科技有限公司

主营:产品范围涉及细胞生物学,分子生物学,免疫...

商铺首页 > 新闻动态 > 人血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒使用说明书
厦门慧嘉生物科技有限公司
16
企业等级: 普通会员
经营模式:
所在地区: 福建 厦门
联系卖家:    QQ在线咨询382603320
手机号码:
公司官网: www.biohj.com
公司地址:

人血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒使用说明书

发布时间:2009-12-25 13:31:09        

人血管内皮抑素抗体(ES-Ab)ELISA试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供体外研究使用                                    

预期应用

ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中ES-Ab含量。

实验原理

用纯化的抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被ES的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的ESHRP标记的亲和素,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的ES-Ab呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。

试剂盒组成及试剂配制

1.         酶联板:一块(96孔)

2.         标准品(冻干品):2瓶,每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml,盖好后静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为100 mU/mL,做系列倍比稀释后,分别稀释100 mU/mL50 mU/mL25 mU/mL12.5 mU/mL6.25 mU/mL3.12 mU/mL1.56 mU/mL,样品稀释液直接作为标准浓度0 mU/mL,临用前15分钟内配制。

如配制50 mU/mL标准品:取0.5ml (不要少于0.5ml ) 100 mU/mL的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。

3.         样品稀释液1×20ml/瓶。

4.         检测稀释液A1×10ml/瓶。

5.         检测稀释液B1×10ml/瓶。

6.         检测溶液A1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液A 1:100稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(100ul/孔),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10ul检测溶液A990ul检测稀释液A的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。

7.         检测溶液B1×120ul/瓶(1:100)临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A

8.         底物溶液1×10ml/瓶。

9.         浓洗涤液1×30ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10.     终止液1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

标本的采集及保存

1.         血清:全血标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。

2.         血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.         其它生物标本:请1000 x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20-80保存,但应避免反复冻融。

注:以上标本置4保存应小于1周,-20-80均应密封保存-20不应超过1个月,-80不应超过2个月;标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测;高血脂的标本不需进行特殊处理,可直接检测。

 

操作步骤

实验开始前,请提前配制好所有试剂;试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时,均应用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。建议各实验室在操作前先进行预实验以建立最佳稀释倍数。

1.         加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul余孔分别加标准品或待测样品100ul,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37反应120分钟。

为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

2.         弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100ul(在使用前一小时内配制),37,60分钟。

3.         温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

4.         每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100ul3760分钟。

5.         温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350ul/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。

6.         依序每孔加底物溶液90ul37避光显色30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。

7.         依序每孔加终止溶液50ul,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.         用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。 在加终止液后立即进行检测。

1.         每次实验留一孔作为空白调零孔(不同于空白孔),该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。测量时先用此孔调OD值至零。

2.         严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室 温。使用后立即冷藏保存试剂。

3.         洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入检测溶液B或底物前确保尽量吸干孔内液体。为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜,以避免液体蒸发;洗板后应尽快进行下步操作,避免酶标板长时间处于干燥状态。

4.         消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。

5.         在储存和温育时避免强光直接照射。

6.         未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配置使用,请精确配置标准品及工作液,尽量不要微量配置(如吸取检测溶液A时,一次不要小于10ul),以避免由于不准确稀释而造成的浓度误差;检测液AB,以及底物溶液在使用前,应置于37温育30分钟;请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液或检测溶液B工作液。

7.         建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。

 

洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层

纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟,根据需

要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。

免责声明
• 本文仅代表作者个人观点,本站未对其内容进行核实,请读者仅做参考,如若文中涉及有违公德、触犯法律的内容,一经发现,立即删除,作者需自行承担相应责任。涉及到版权或其他问题,请及时联系我们 304108043@qq.com
  • QQ在线咨询382603320
  • 手机:
  • 联系我时务必告知是在产品网上看到的!

厦门慧嘉生物科技有限公司

商铺|诚信档案

地址:

电话:传真:

免责声明:以上信息由会员自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布会员负责,产品网对此不承担任何责任。产品网不涉及用户间因交易而产生的法律关系及法律纠纷, 纠纷由您自行协商解决。

风险提醒:本网站仅作为用户寻找交易对象,就货物和服务的交易进行协商,以及获取各类与贸易相关的服务信息的平台。为避免产生购买风险,建议您在购买相关产品前务必 确认供应商资质及产品质量。过低的价格、夸张的描述、私人银行账户等都有可能是虚假信息,请采购商谨慎对待,谨防欺诈,对于任何付款行为请您慎重抉择!如您遇到欺诈 等不诚信行为,请您立即与产品网联系,如查证属实,产品网会对该企业商铺做注销处理,但产品网不对您因此造成的损失承担责任!

联系:304108043@qq.com是处理侵权投诉的专用邮箱,在您的合法权益受到侵害时,欢迎您向该邮箱发送邮件,我们会在3个工作日内给您答复,感谢您对我们的关注与支持!

厦门慧嘉生物科技有限公司 电话: 传真: 联系人:

地址: 主营产品:产品范围涉及细胞生物学,分子生物学,免疫学及生物化学等实验室科学研究试剂,包括细胞系,细胞培养,ELISA和免疫组化抗体,一抗,二抗,单克隆和多克隆抗体,PCR及放免试剂盒,生化试剂以及各类实验仪器。

Copyright © 2024 版权所有: 产品网

免责声明:以上所展示的信息由企业自行提供,内容的真实性、准确性和合法性由发布企业负责。产品网对此不承担任何保证责任。

商盟客服

您好,欢迎莅临,欢迎咨询...