发布时间:2010-01-03 12:03:37
小鼠胰岛素(Insulin)ELISA试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
检测范围: 96T
30pg/ml-800pg/ml
使用目的:
本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin),再与HRP标记的胰岛素(Insulin)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。
试剂盒组成
1 |
30倍浓缩洗涤液 |
20ml×1瓶 |
7 |
终止液 |
6ml×1瓶 |
2 |
酶标试剂 |
6ml×1瓶 |
8 |
标准品(1600pg/ml) |
0.5ml×1瓶 |
3 |
酶标包被板 |
12孔×8条 |
9 |
标准品稀释液 |
1.5ml×1瓶 |
4 |
样品稀释液 |
6ml×1瓶 |
10 |
说明书 |
1份 |
5 |
显色剂A液 |
6ml×1瓶 |
11 |
封板膜 |
2张 |
6 |
显色剂B液 |
6ml×1/瓶 |
12 |
密封袋 |
1个 |
标本要求
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
800pg/ml |
5号标准品 |
150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 |
400pg/ml |
4号标准品 |
150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 |
200pg/ml |
3号标准品 |
150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 |
100pg/ml |
2号标准品 |
150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 |
50pg/ml |
1号标准品 |
150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 |
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置
4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7. 温育:操作同3。
8. 洗涤:操作同5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,
10.
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