小鼠胰岛素(Insulin)ELISA***盒使用说明书

小鼠胰岛素(Insulin)ELISA***盒使用说明书

本***盒仅供研究使用。

检测范围：                                                          96T

30pg/ml-800pg/ml

使用目的：

本***盒用于测定小鼠***、血浆及相关液体样本中胰岛素(Insulin)含量。

实验原理

本***盒应用双***夹心法测定标本中小鼠胰岛素(Insulin)水平。用纯化的小鼠胰岛素(Insulin)***包被微孔板，制成固相***，往包被单抗的微孔中依次加入胰岛素(Insulin)，再与HRP标记的胰岛素(Insulin)***结合，形成***-抗原-酶标***复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成***终的***。颜色的深浅和样品中的胰岛素(Insulin)呈正相关。用***在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中小鼠胰岛素(Insulin)浓度。

***盒组成

标本要求

1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3***辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

操作步骤

1.         标准品的稀释：本***盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.         加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标***，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品***终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.         温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。  

4.         配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

5.         洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。

6.         加酶：每孔加入酶标***50μl，空白孔除外。

7.         温育：操作同3。

8.         洗涤：操作同5。

9.         显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂***μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

10.